T-SPOT.TB 在艾滋病并肺結(jié)核診斷中的價(jià)值分析

  肺結(jié)核為艾滋病常見、多發(fā)性感染疾病，超過30% 的艾滋病患者死于肺結(jié)核 [1]。當(dāng)前，結(jié)核感染臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是結(jié)核菌培養(yǎng)，但該方法用時(shí)較長(zhǎng)，且檢測(cè)陽(yáng)性率較低，無法及時(shí)準(zhǔn)確的對(duì)患者進(jìn)行診斷[2]。Ｔ細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn) (T-SPOT.TB) 是一種用于結(jié)核感染檢測(cè)的新技術(shù)，其原理是檢測(cè)機(jī)體是否存在分泌IFN-γ 的 Mtb 抗原特異性Ｔ淋巴細(xì)胞，進(jìn)而判斷機(jī)體是否感染結(jié)核疾病 [3]。我院自 2011 年 1 月開始使用T-SPOT.TB 對(duì)艾滋病患者是否感染肺結(jié)核進(jìn)行診斷，效果滿意?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料  收集 2011年1月至2014年6月間我院收治的53例艾滋病并肺結(jié)核患者作為觀察組，46 例艾滋病無肺結(jié)核患者作為對(duì)照組。患者均經(jīng)艾滋病初篩和確診試驗(yàn)確診。觀察組肺結(jié)核的診斷則依據(jù)《肺結(jié)核診斷和治療指南》，且參照患者癥狀、影像學(xué)、細(xì)菌學(xué)結(jié)果。觀察組 53 例：男 29 例，女 24 例；年齡26~72 歲，平均(46.1±13.4) 歲。對(duì)照組46 例：男 28 例，女 18 例；年齡 28~70 歲，平均 (45.2±14.7) 歲。

1.2 方法  患者取 5ml 外周靜脈血，加入肝素抗凝，分離外周血單個(gè)核細(xì)胞 (PBMC)。加入 AIM-V 培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度至 2.5×106/ml。取已包被抗 IFN-γ 抗體微量板，加入 50μl AIM-V 至陰性對(duì)照孔，加入50μl 植物血凝素 (PHA) 至 PHA 對(duì)照孔，加入 50μl結(jié)核分枝桿菌特異抗原 A(ESAT-6) 至 A 檢測(cè)孔，加入 50μl 抗原 B(CFP-10) 至 B 檢測(cè)孔。各孔分別加入100μl 2.5×105/ml 的 PBMC 溶液，置于 5%CO2 培養(yǎng)箱中，37℃下培養(yǎng) 20h。用 PBS 洗脫，各孔分別加入50μl 標(biāo)記過的 IFN-γ 抗體，4℃下孵育 1h，PBS 洗脫，加入 50μl 底物進(jìn)行顯色，室溫下孵育 7min，純水洗滌終止反應(yīng)。對(duì)各孔顏色斑點(diǎn)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。判斷標(biāo)準(zhǔn)：①當(dāng)陰性對(duì)照孔的點(diǎn)數(shù)＜ 6 時(shí)，( 檢測(cè)孔點(diǎn)數(shù) -陰性對(duì)照孔點(diǎn)數(shù) ) ≥６為陽(yáng)性；②當(dāng)陰性對(duì)照孔的點(diǎn)數(shù)≥６時(shí)，檢測(cè)孔點(diǎn)數(shù) > 陰性對(duì)照孔的 2 倍為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以 SPSS19.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料以 χ2 檢驗(yàn)。P<0.05 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組陽(yáng)性率比較  觀察組 T-SPOT.TB 試驗(yàn)陽(yáng)性率為 81.1%(43/53)，對(duì)照組 T-SPOT.TB 試驗(yàn)陽(yáng)性率為 15.2%(7/46)。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=42.802，P=0.000)。

2.2T-SPOT.TB 診斷艾滋病并肺結(jié)核的價(jià)值 對(duì) T-SPOT.TB 診斷艾滋病并肺結(jié)核的價(jià)值進(jìn)行了分析：靈敏度為 86.0%，特異度為 79.6%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為81.1%，陰性預(yù)測(cè)值為 84.8%。

2.3CD4+ 計(jì) 數(shù) 對(duì) T-SPOT.TB 陽(yáng) 性 率 的 影 響將觀察組患者依據(jù) CD4+ 水平分為兩組。CD4+ 計(jì)數(shù)

≥ 200/μl 患 者 18 例，T-SPOT.TB 試 驗(yàn) 陽(yáng) 性 率 為83.3%(15/18) ；CD4+ 計(jì)數(shù) <200/μl 患者 35 例，T-SPOT.TB 試驗(yàn)陽(yáng)性率為 74.3%(26/35)。兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=0.577，P=0.448)。

3 討論

肺結(jié)核臨床為艾滋病患者常見的機(jī)會(huì)感染疾病，同時(shí)也是艾滋病患者死亡的原因。因此，對(duì)肺結(jié)核進(jìn)行及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷，并制定有效的治療及抗逆轉(zhuǎn)錄病毒方案，對(duì)患者預(yù)后非常重要。但肺結(jié)核患者臨床缺乏典型影像學(xué)表現(xiàn)，痰細(xì)菌檢測(cè)的陽(yáng)性率低，臨床檢測(cè)常出現(xiàn)漏診和誤診 [4]。因此，有效的檢測(cè)方法一直受廣大醫(yī)師的關(guān)注。T-SPOT.TB 試驗(yàn)是由酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)發(fā)展起來的結(jié)核感染檢測(cè)新技術(shù)，檢測(cè)原理為：患者發(fā)生結(jié)核感染后，分泌產(chǎn)生記憶性的 T 淋巴細(xì)胞，給予結(jié)核相關(guān)抗原的刺激，記憶性 T 淋巴細(xì)胞可快速轉(zhuǎn)增殖為效應(yīng)性的Ｔ淋巴細(xì)胞，并會(huì)分泌出IFN-γ，因此對(duì) IFN-γ 的數(shù)目進(jìn)行檢測(cè)，就可以判定機(jī)體是否發(fā)生結(jié)核感染 [5]。國(guó)內(nèi)外研究顯示，普通人群 T-SPOT.TB 試驗(yàn)對(duì)結(jié)核感染診斷的準(zhǔn)確率超過了 90%[6-8]。童學(xué)成等 [9] 的研究中，使用 T-SPOT.TB 試驗(yàn)對(duì) 45 例并發(fā)肺結(jié)核艾滋病患者進(jìn)行了診斷，其診斷準(zhǔn)確率達(dá)到了 80%，顯著性高于未合并肺結(jié)核患者的 13.3%。陳仁芳等 [10] 使用 T-SPOT.TB 試驗(yàn)對(duì) 26例并活動(dòng)性肺結(jié)核艾滋病患者進(jìn)行了診斷，其準(zhǔn)確率達(dá)到了 92.3%，顯著高于未合并活動(dòng)性肺結(jié)核患者的16.7%。這些結(jié)果提示了，T-SPOT.TB 試驗(yàn)可對(duì)艾滋病患者是否感染結(jié)核進(jìn)行診斷。

本研究對(duì)合并肺結(jié)核和未合并肺結(jié)核的艾滋病患者進(jìn)行了 T-SPOT.TB 試驗(yàn)，結(jié)果顯示：觀察組陽(yáng)性率為81.1%(43/53) 顯著高于對(duì)照組的 15.2%(7/46)。本組進(jìn)一步研究了 T-SPOT.TB 對(duì)艾滋病并肺結(jié)核的診斷價(jià)值，結(jié)果顯示：T-SPOT.TB 的靈敏度為 86.0%，特異度為 79.6%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為 81.1%，陰性預(yù)測(cè)值為84.8%。本組研究結(jié)果提示，T-SPOT.TB 可有效對(duì)艾滋病并肺結(jié)核進(jìn)行診斷，具有較高的靈敏度和特異度。

在進(jìn)一步研究中，我們探討了機(jī)體免疫狀態(tài)診斷結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)：CD4+ 計(jì)數(shù)≥ 200/μl 患者診斷陽(yáng)性率為83.3%(15/18) 與 CD4+ 計(jì)數(shù) <200/μl 患者診斷陽(yáng)性率74.3%(26/35) 比較，無明顯差異。提示了機(jī)體免疫狀態(tài)對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響不大。綜上所述，T-SPOT.TB 試驗(yàn)可對(duì)艾滋病并肺結(jié)核進(jìn)行有效診斷，具有較高的敏感度和特異度。

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